［文献解读］ctDNA监测黑色素瘤免疫细胞治疗

Circulating Tumor DNA as an Early Indicator of Response to T-Cell Transfer Immunotherapy in Metastatic Melanoma.
Clin Cancer Res. 2016 Aug 1

概述
通过监测转移性黑色素瘤患者的BRAF V600E ctDNA水平在治疗早期指示过继免疫细胞治疗（本文采用TIL治疗）的效果。
亮点
发现过继免疫细胞治疗时，BRAF V600E ctDNA的呈现三种动态变化模式、并与治疗效果密切相关。
意义
发现一个具有潜力的能够在免疫细胞治疗早期提示疗效的指标。
背景
1.转移性黑色素瘤(MM)传统放化疗五年生存率极低，不超过5%，免疫检查点抑制剂可提高5年生存率至20%，肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）治疗效果更佳，约50%的患者出现客观缓解。
2.TIL 免疫治疗时，非皮肤性病灶在TIL回输30-60天后都看不到显著的变化，往往需要1-2年后方能确定是否完全缓解，急需一个指示治疗效果的早期指标。
3.约80%的转移性黑色素瘤患者中存在BRAF V600E 突变，39-83% V600E阳性的III-IV期黑色素瘤患者中可检出V600E ctDNA，同时，生化治疗、靶向生物治疗和免疫检查点治疗中，V600E ctDNA均呈现动态变化，或可作为监测免疫细胞治疗效果的早期标志物。
结果
1.大于90%的BRAF V600E突变的临床IV期黑色素瘤患者中可以在ctDNA中检出BRAF V600E突变。
2. BRAF V600E ctDNA的早期动态变化与TIL免疫治疗的效果呈现相关性。
3. BRAF V600E ctDNA的早期动态变化的三种模式及患者临床特征。
转移性黑色素瘤患者中可在ctDNA中检出BRAF V600E突变

临床试验设计
1.93位重度治疗的转移性黑色素瘤患者
2.自体TIL体外分离后，激活、扩增、回输
3.回输前采用Cy+Flu或TBI清除患者自身淋巴细胞
4.随访2000年-2007年

1.采用等位基因特异性PCR（castPCR）技术
2.检测血清ctDNA中的BRAF V600E突变率
3.mutant Allele Frequency (AF) 突变等位基因频率=突变/(突变+野生型) *100%

1.焦磷酸测序检测了93名MM临床IV患者的肿瘤组织，48例存在BRAF V600E 突变
2.其中44例患者的ctDNA中检测到BRAF V600E 突变，>90%
BRAF V600E ctDNA的早期动态变化与TIL疗效呈现相关性
Three Patterns

对44例检出V600E ctDNA突变的患者进行筛选，血清样品符合条件的有39例，基于这39例病人的样本，发现了TIL治疗后ctDNA动态变化的3种模式。
Correlation of BRAF V600E ctDNA dynamic patterns with RECIST* category.

* RECIST: Response Evaluation Criteria In Solid Tumors  实体瘤疗效评价标准
http://www.irrecist.com/recist/
CR: complete response
PR: partial response
NR/SD: non-response/stable disease
PD: progressive disease
三种模式与临床治疗效果有何联系?
从临床试验常用的实体瘤疗效评价标准，可以看到：
模式1：有9例CR，4例PR；
模式2：4例PR，6例NR；
模式3：1例CR，6例PR，9例NR。
呈现明显的相关性。
Overall stratified by BRAF V600E ctDNA dynamic patterns

模式1组的总体生存率远高于模式2和3组。
BRAF V600E ctDNA的早期动态变化的三种模式及患者临床特征
Pattern 1 (Early peak with clearing)

模式1的特点：
Early peak: 5-9天内
Initial clearing: 39内
患者情况：
共9例CR，其中7例最终判为CR，期间及随后一直未检出V600EctDNA；Pt5监测终止后被判为CR，期间未检测出；Pt10判为CR后49天检出V600EctDNA阳性，随后1个月后复发，即ctDNA检测预测了复发。
共4例PR，起始清除点均在26天内，其中Pt27在991天发现一个脑转移，手术成功切除后一直没有复发（1804天）；Pt21和Pt25均在肿瘤进展前检测到V600E ctDNA阳性，预测了复发；Pt23则是在最后一个监测点后一个月左右复发。
提示：V600E ctDNA的早峰和快速清除预示着较好的治疗效果。
Pattern 2 (Early peak without clearing)

模式2的特点：
融合TIL后7天内出现早峰，但没有立即清除，持续检测到V600E ctDNA。
患者情况：
4例PR，Pt3和Pt6均为单器官复发，手术成功后，维持无病状态以及V600E ctDNA阴性状态长达7、8年；6例NR，早峰后均持续检出V600E ctDNA。
Pattern 3 (No/minimal early peak with or without clearing)

模式3的特点：
融合TIL后没有出现BRAF V600E ctDNA的清除峰，或很晚出现，或一直未被清除。
患者情况：
1例CR，TIL治疗前32天使用了抗体药易普利姆玛（anti-CTLA-4），有可能影响了TIL治疗效果；
6例PR，5例NR。
讨论
BRAF V600E ctDNA的变化模式与治疗效果密切相关。
BRAF V600E ctDNA的变化模式可作为TIL治疗的早期标志物，Pattern1的疗效好，Pattern3的疗效差。
BRAF V600E ctDNA的变化模式具有长期监测疗效的潜力，Pattern2中先于复发检测到V600E ctDNA的变化。
还需扩大样本及进行前瞻性研究。

转自吉因加科技微信订阅号